今天来给大家分享一下关于载体构建图怎么做-载体及构建的问题,以下是对此问题的归纳整理,让我们一起来看看吧。

如何用DNAMAN绘制载体地图
通过 Restriction/Draw map 命令打开质粒绘图界面:将鼠标移动到圆圈上,等鼠标变形成“I”时,单击鼠标左键,出现如下菜单:
菜单说明如下:
Position 当前位置
Add Site 添加酶切位点
Add Element 添加要素
Add Text 添加文字
Insert Fragment 插入片断
Copy Fragment 复制片断
Cut Fragment 剪切片断
Remove Fragment 清除片断
Frame Thickness 边框线粗细调节
点击 Add Site 选项,出现如下对话框:
参数说明如下:
Name 要添加的酶切位点的名称(例如 HindIII)
Position 位置(以碱基数表示)
点击 Add Element 选项,出现如下对话框:
参数说明如下:
Type 要素类型(共有三种类型,鼠标点击即可切换)
(c)olor/Pattern 填充色(共有 16 种颜色供选择)
Name 要素名称
Start /End/Size 要素起点/终点/粗细度 点击 Add Text 选项,出现如下对话框:
输入要添加的文字,点击 Font 按钮设置字体和格式,选择 Horizontal(水平显示)或
Vertical(垂直显示),
点击按钮即可。
在绘图界面空白处,双击鼠标,出现:
通过此对话框,你可以完成各种添加项目的操作,也可以修改已添加的项目。
DNAman是美国LynnonBiosoft公司开发的高度集成化的分子生物学应用软件,几乎可完成所有日常核酸和蛋白质序列分析工作,包换多重序列比对、PCR引物设计、限制性酶切分析、蛋白质分析、质粒绘图等。
构建质粒载体的一般步骤有哪些?
(1)根据你已知的序列设计带有酶切位点的引物。(2)PCR,跑胶,看看你的目的条带大小对不。
(3)条带对的话再重新跑个大孔胶,然后切胶回收。(具体步骤根据你们所用试剂盒上的说明书进行),切胶回收后还需电泳,看你回收后怎么样。
(4)拿着你的回收液与你的TA载体进行连接(具体操作见载体试剂盒说明书)
(5)连接后要转化进大肠杆菌感受态中。37℃ 200rpm 摇菌一个小时。
(6)之后涂布至固体培养基上。(培养基是带有抗生素的,这个抗生素的选择要根据你的载体来选)
(7)37℃倒置培养一夜
(8)第二天早上,挑取单菌落,进行菌落PCR,检测是否为假阳性。
(9)PCR之后如果条带正确,则摇菌,摇的就是你检测之后的那个单菌落。
(10)可以直接拿菌落测序,或者提取质粒测序。(记住要保存菌种)
(11)如果测序得到的序 *** 实为你最初设定的那个序列,则再摇你保存的那个菌种。
(12)提取质粒,做酶切。酶切的体系要看你所用的酶。
(13)酶切后还是需要进行回收。
(14)将回收的片段与你已经酶切好的表达载体的片段连接。
(15)再转化至大肠杆菌扩增。
(16)PCR检菌,酶切检菌。
(17)检菌正确,则你的表达载体构建完成。
因为我不知道你是否要构建到表达载体中,还是构建到克隆载体就可以,所以后面说的不是很详细,但是大体的步骤就是这样,只要你会构建克隆载体了,后面的表达载体基本也没有问题了,只是多下些功夫就可以了。
我上面说的都是很简单的语言,只供参考,不能作为书面语。有什么问题可以再交流。

